Tổng quan về ELISA
Phương pháp ELISA được phát triển vào những năm 1970, dựa trên sự liên kết giữa một enzyme và kháng thể hoặc kháng nguyên để phát hiện và đo lường sự có mặt của một chất cụ thể (ví dụ: protein, hormone, kháng thể) trong mẫu xét nghiệm. Có bốn loại ELISA phổ biến:

• Direct ELISA: Kháng thể gắn enzyme liên kết trực tiếp với kháng nguyên.
• Indirect ELISA: Sử dụng kháng thể thứ cấp có gắn enzyme để liên kết với kháng thể chính.
• Sandwich ELISA: Phát hiện kháng nguyên giữa hai kháng thể (bắt và phát hiện).
• Competitive ELISA: Dùng để phát hiện kháng nguyên hoặc kháng thể dựa trên sự cạnh tranh.

Các bước thực hiện phương pháp ELISA


 

Bước 1: Chuẩn bị mẫu và đĩa ELISA
Mẫu được cho vào các giếng của đĩa ELISA, vốn đã được phủ một lớp kháng nguyên hoặc kháng thể.

Bước 2: Ủ và rửa đĩa
Đĩa được ủ ở nhiệt độ nhất định để kháng nguyên và kháng thể kết hợp. Sau đó, đĩa được rửa để loại bỏ các chất không gắn kết.

Bước 3: Thêm kháng thể gắn enzyme
Kháng thể có gắn enzyme sẽ được thêm vào. Nếu sử dụng phương pháp indirect hoặc sandwich, kháng thể phát hiện (có gắn enzyme) sẽ liên kết với kháng nguyên hoặc kháng thể.

Bước 4: Thêm cơ chất
Cơ chất (substrate) được thêm vào để enzyme chuyển hóa thành một sản phẩm có màu. Màu sắc này tỷ lệ thuận với nồng độ của chất cần đo.

Bước 5: Đọc kết quả
Sử dụng máy đọc quang phổ để đo cường độ màu tại bước sóng nhất định, từ đó xác định nồng độ của chất cần đo.